RPPA蛋白组学检测服务

服务介绍

反相蛋白微阵列（Reverse Phase Protein Array,RPPA）是一种研究细胞信号通路和绘制蛋白质表达谱的重要方法，包含了300余个蛋白质标记物，涵盖所有主要的癌症和药物靶点相关的细胞信号通路，专为细胞信号转导、系统生物学和肿瘤免疫研究者量身定制。RPPA技术与基因过表达或敲除系统的强力结合，可以同时分析多种癌症相关基因的表达变化，有利于我们快速找到和评估生物标志物，同时更好地研究药物机制，这将有效推动基础医学、转化医学、临床医学及药物靶点的研发，促进癌症的精准医疗！

服务内容

在进行RPPA蛋白质组学分析，获取大数据之前，您需要提供待研究的细胞或组织样本，样本可自己提供（具体要求可与我公司技术人员沟通）也可以选择由维真生物为您准备。

*如您对上述服务感兴趣，请您点击“欢迎垂询”留下您的信息，我们将尽快联系您。

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服务优势

1、基因过表达与敲除系统

为探索某一基因的生物学功能，我们通常会从功能获得和功能丧失两方面入手开展研究，基因过表达与敲除系统作为基因研究的重要手段，应用非常广泛。维真生物具有高效、稳定地基因过表达与敲除系统，可提供全方位、一站式的基因过表达和敲除的质粒构建、病毒包装、细胞系建立以及相应的筛选检测服务，满足客户多样化的实验需求。

以下为两个基因过表达的免疫印迹结果和基因敲除后的测序结果示例：

基因过表达及敲除效果检测结果

2、肿瘤研究利器——“神通广大”的RPPA

不同于传统的抗体微阵列检测技术，RPPA需要先将组织或细胞裂解液以高密度微阵列的形式打印到固相基底上，然后再用特异性抗体检测样本中的蛋白，从而批量地获取到几百种蛋白的定量数据。简单来说，我们可以把RPPA技术看成是一种定量高通量的ELISA/斑点印迹法。

现在RPPA平台包含了300余个蛋白质的标记物，涵盖所有主要的癌症和药物靶点相关的细胞信号通路，专为细胞信号转导、系统生物学和肿瘤免疫研究者量身定制。当前，无论是在研究肿瘤的起始与进展，还是评估生物标志物和药物机制等方面，RPPA技术都能发挥非常重要的作用。

RPPA系统蛋白组学靶点示例图

RPPA技术具有其它高通量蛋白组学所不具备的定量能力、超高灵敏度、大样本分析能力等，已经得到全球研究工作者的高度认可。利用RPPA这一平台我们能够同时分析成百上千种细胞或者组织样本（样本需求量极低），并且能对多达几百种的低丰度蛋白，包括多种细胞信号蛋白、免疫通路蛋白、修饰后蛋白（如磷酸化、甲基化、乙酰基化）进行平行蛋白组学差异表达比对分析。

当前，RPPA技术主要应用在癌症研究领域，在癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）项目中我们就广泛使用了RPPA技术来进行肿瘤蛋白质组的研究，目前已经获得了超过7600例肿瘤组织样本中的功能性蛋白组学数据。

RPPA平台的优势

3、RPPA在HEK293细胞上“大显身手”

首先，我们将134个癌相关基因分别在HEK293细胞中进行过表达，分别提取细胞裂解液，通过对这134个过表达的细胞样本进行RPPA蛋白质组分析研究我们发现，当某一癌基因过表达后，其他癌基因的表达也会发生改变，而且呈现差异化的表达。

134个OE靶点与相对应134个RPPA蛋白表达排序矩阵

对差异表达基因进行信号通路归类分析

此外，我们还构建了大量癌基因的HEK293敲除细胞系，同时进行了RPPA蛋白组学分析，如图所示，我们随机抽取了A-G这7个癌基因的RPPA结果进行分析，其中样本数据按行聚类，即按细胞系样本聚类；样本数据按列聚类，即按抗体聚类，我们发现在细胞系中敲除某一蛋白的表达后，相较于对照组，其余六种蛋白的表达水平可出现明显的上调/下调，且每种蛋白所受影响和影响程度有所不同。这提示，这几种癌基因可能存在某些相互作用，处于同一个信号通路或者相关的信号转导途径中。

7个KO靶点与对应RPPA蛋白表达排序矩阵

接着，我们从中选取了两个基因的过表达和敲除细胞样本并对其RPPA的结果进行了详细分析，通过分析样本中其他癌基因的表达情况，我们发现过表达或敲除某一癌基因能对某些靶点可以带来完全相反的影响，操纵单个癌基因的表达，可能对其他癌基因的表达和活性产生重要影响。说明，通过借助这些RPPA的大数据能更有利于我们快速找到和评估生物标志物，同时更好地研究药物机制。

过表达或敲除A基因对某些靶点完全相反的影响

过表达或敲除E基因对某些靶点完全相反的影响

服务流程

客户出具需求→项目评估→项目启动（质粒构建/病毒包装服务/稳转细胞株和敲除细胞株构建/RPPA蛋白组学检测服务）

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资料完善中…

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