关于Vector-based shRNAs，为了满足广大科研工作者不同的实验需求，维真生物可以提供多种shRNA质粒构建服务：

单个shRNA载体构建，客户提供高效siRNA靶点，维真生物公司根据靶点构建shRNA质粒。

套餐shRNA质粒构建，维真生物根据客户提供的靶基因信息构建3保1或者4保1 shRNA质粒。

多和1 shRNA载体构建^特色1，维真生物根据客户提供的高效siRNA靶点和靶基因信息构建多和1 shRNA质粒。

以4 in 1 shRNA为例：该服务是将4条shRNA序列克隆至1个shRNA质粒。维真生物的4 in 1 shRNA质粒不仅可以用于转染细胞，也可包装成病毒用于病毒导入宿主。

4 in 1 shRNA下调GFP表达	4 in 1 shRNA下调RCAN1表达

1）将4个作用于同一基因不同mRNA部位的shRNA序列克隆进同一shRNA载体，增加了目的基因下调表达的概率。

2）将高效的、作用于2-4个靶基因的shRNA序列克隆进同一shRNA载体，实现2-4个基因同时下调表达的目的。

3）无需序列筛选，大大减少实验工作量。

4）多种4 in 1 shRNA病毒载体的选择，包括腺病毒穿梭载体、慢病毒载体和腺相关病毒载体，实现不同的实验目的。

针对同一目的基因的4条shRNA序列，不能具体确定哪条shRNA序列的干扰效果最好。

mir30-based shRNA质粒构建^特色2，实现组织特异性基因沉默。

shRNA的RNAi机制与microRNA成熟机制一样，因此，shRNA也可以由聚合酶II型启动子驱动表达。这类启动子包括广谱启动子(如CMV、CAG和EF1a等)和组织特异性启动子(如hSyn、TBG和cTnT等)，可以启动较大的基因转录，且需要polyA等转录终止信号。维真生物可以根据客户指定的启动子和提供的shRNA序列将其构建至mir30-based shRNA质粒。mir30-based shRNA结构示意图如下：

诱导性shRNA质粒构建^特色3，包括Cre/loxp，Flp/Frt和Tet on等诱导系统。

以Cre on shRNA为例，该服务是使用FLEX(flip-excision)系统实现shRNA诱导表达。FLEX是一种非常强大的控制基因表达的方法，它采用2对异质、反向的loxp位点(loxP和lox2272)，经过DNA翻转产生带有不同loxp位点的DNA翻转，防止进一步的DNA翻转，实现目标基因不可逆的翻转。维真生物采用改良版FLEX，将2对异质、反向的loxp位点置于启动子两边，通过cre作用决定启动子方向，通过不同荧光蛋白可视化shRNA的表达。

1. 维真生物载体的启动子是哪些？

维真生物载体使用两类启动子：人源的U6启动子和H1启动子。

2. 人源的U6启动子和H1启动子是否可以应用于大鼠、小鼠或其他哺乳动物细胞中？

可以的。人源的U6启动子和H1启动子之间没有物种差别。这些启动子在大鼠、小鼠或其他哺乳动物细胞中的启动效率也非常好。

3. 你们保证siRNA干扰载体的效果吗？

如果针对一条被干扰的基因设计三条或四条shRNA，维真生物承诺在客户细胞转染效率达80%以上的条件下，如果3个或者4个靶点shRNA没有任何一个对靶基因的抑制效率在mRNA水平上达到70%以上，公司将免费重新设计并构建4个新的shRNA质粒，需要增加一个实验周期。若重新构建的shRNA载体仍然没有任何一个对靶基因mRNA的抑制效率能够达到70%，可能和该基因有关，公司仅收取客户单次shRNA载体构建费用。

4. 针对一条被干扰的基因，你们建议订购几个干扰载体？

针对一条被干扰的基因，我们建议至少构建3个干扰载体。

5.我如何监控转染效率？

您可以采用维真生物带有GFP标记的shRNA载体直接地监控转染效率。

6. 维真生物能够利用来自其它公司的载体构建vector-based shRNA载体吗？

可以，不过需要您提供给我们载体。

7. Vector-based shRNA的交付周期为多久？

交付周期为2-3周。

8. 使用病毒感染细胞的优势是什么？

病毒介导的shRNA可以克服一些由于靶细胞影响RNAi的问题，如原代细胞、成纤维细胞和树突状细胞等，这些细胞的转染效率低。