稳定细胞系建立

高质量的稳定细胞系在生物学研究中扮演着非常重要的角色，包括基因功能研究、重组抗体、药物开发等。稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛应用的稳转株构建方法，具有高效整合、目标细胞广泛等特点。维真生物可为科研工作者提供OE质粒构建、OE慢病毒包装、过表达效果验证以及OE细胞系建立等服务。OE=overexpression

维真生物具有多年稳转株筛选经验，可为客户筛选高质量的稳定细胞株，客户可从维真生物细胞库中选择相应的细胞株，也可提供自有细胞株。具体服务内容如下：

如您对上述服务感兴趣，请您点击“欢迎垂询”留下您的信息，我们将尽快联系您。客户提供自有细胞，需要额外支付细胞测试费用！

将外源DNA/shRNA克隆到带有某种抗性基因的载体上，重组载体被转染至宿主细胞并整合到其染色体中，并能随细胞分裂稳定传递下去，用载体中所含抗性基因进行筛选。常用的真核表达载体抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、杀稻瘟菌素（blasticidin)和嘌呤霉素(puromycin)。

1. 种子细胞优良：维真生物所有的细胞均从ATCC 细胞库购买，代数低且无污染；

2. 生产工艺稳定：严格的筛选及靶基因表达验证体系；

3. 细胞活力无损：严格的建系后连续 5 代细胞增殖活力评价；

4. 产品质量保证：采用 RT-qPCR 验证，保证表达水平。

慢病毒技术手册

1. 在什么情况下，我需要建立稳转细胞系？

稳转细胞系是相对瞬时转染而言的。瞬时转染的表达时间短暂，外源基因导入整合基因组的几率非常低，绝大部分以游离形式存在，不能随细胞分裂而一同复制，导致最后拷贝数被稀释，无法达到持续表达外源基因的目的。通常，在下面几种情况下需要建立稳转细胞系：

①长期在目的细胞中研究基因功能，通过建立稳转细胞系，可以降低频繁转染或者病毒包装的成本，方便实验研究；

②部分蛋白半衰期极长，瞬时RNA只能干扰表达，无法去除已经表达的目的蛋白，通过构建稳转细胞系可以实现更好的基因干扰效果；

③瞬转会引入极高拷贝数的表达，导致因为人为因素造成实验结果的不精确，建立稳转细胞系可以帮助筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究；

④需要用诱导表达系统的，主要是一些致死基因或者是需要时空表达的；

⑤需要用细胞做动物实验的，比如裸鼠成瘤等，往往需要建立稳转细胞系。

2. 建立稳转细胞系时用质粒好还是慢病毒好？

理论上用质粒可以建立稳定细胞株的，但是质粒整合入基因组的效率极低，很难成功。慢病毒可以携带外源基因随机整合进基因组，效率很高，是建立稳定细胞株的理想方式。通过慢病毒筛选稳定细胞株是目前主流的方法。

3. 影响稳定细胞株建立的因素有哪些？

①外源基因整合的几率：决定了稳转株筛选的难易程度；

②插入外源基因片段的拷贝数：通常，低拷贝或者单拷贝可以降低人为因素的干扰；

③整合位点转录活跃度：决定了稳转株筛选细胞后稳转株中外源基因片段的表达质量；

④外源基因片段整合到细胞后的稳定性：不同的整合位点决定了外源片段在染色体中的稳定性，有些区域易发生重组或者丢失，从而使稳转株筛选后出现丢失的现象。

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